一、成纤维细胞计数:成纤维细胞合成和分泌胶原蛋白,胶原蛋白再在细胞外组装成胶原纤维,因此,计数成纤维细胞的数量,也可间接反映出合成和分泌胶原蛋白的能力。成纤维细胞的计数方法:取皮肤组织适量,用20%的福尔马林溶液固定,按常规方法制成HE切片,在显微镜下进行成纤维细胞计数,每片计数2000个细胞,找出其中的成纤维细胞数目。
二、不同性质胶原蛋白的测定:第一、标本处理:动物取皮肤约约5cm²,去毛及真皮层和皮下脂肪,生理盐水洗净,滤纸吸干,称取皮肤2g,细切成1×1mm大小,加入提取液,以高速匀浆器匀浆;第二:皮肤中各种胶原蛋白成分缓冲液及3%乙醇溶液提过液,每一过程均反复两次;中性盐溶液部分用12000转/分,离心45分钟后,取上清液;酸性部分用20000/分,离心90分钟,取上清液,最后沉淀部分即为不溶性溶液。分别取样,以改良的Kivirikko等人的方法测定前羟脯氨酸含量,并计算出不同性质胶原蛋白的含量。
三、胶原检测的评价及对策
胶原分子间的交联,是引起皮肤老化的重要因素。不同组织胶原成分和结构各异,且随着增龄各型胶原可发生含量增减及交联的变化,并导致相应组织变化性质的改变。因此,皮肤老化及其抗皮肤老化研究中,胶原测定可作为皮肤老化过程中你叫特殊和敏感的指标。有报道认为,在衰老进程中,随着组织细胞和弹性纤维的变性和减少,胶原合成增加,多肽链间的交联增多,胶原变性增加,使胶原纤维可溶性和可塑性降低,造成皮肤组织变硬,缺乏弹性和韧性。进行皮肤老化机理研究时,如发现受试动物羟脯氨酸浓度随着增龄增加,且这种胶原增加与变性交联平行,那么,可以认为皮肤老化的发生和发展加快。如果观察和评价某种药物和保健方法对抗皮肤老化的作用和效果,选择对胶原的测定是十分重要的指标之一。因为,皮肤组织中胶原的含量比皮肤的弹性和韧性测定更加准确和敏感,胶原含量变化越明显,测定的结果也准确