衰老机制中的交联说是分子生物学具有代表性的学说。而胶原蛋白随增玲在体内的代谢变化，特别是他出现在老化皮肤组织中的一些特征性的现象，为老化皮肤组织结构和功能的研究提供了重要的依据。因此，在进行皮肤老化的研究中，常常以胶原相关的指标和含量作为判断皮肤老化的重要标志。
一、胶原蛋白的检测方法
胶原是皮肤组织中真皮层的重要结构，也是机体许多组织的重要组成成分，他起着十分重要的支架和保护作用。随着年龄的增长，胶原的含量和多种理化性质以及生物学特性均发生在不同程度的变化。因此，测定其含量对皮肤老化的研究十分重要。
（一） 羟脯氨酸的检测和方法：胶原特性的化学成分是羟脯氨酸。在单位分子数中羟脯氨酸的含量是
恒定的，约占胶原含量的12-14%.因此基础和临床医学研究中常用羟脯氨酸的含量来间接反映胶原的含量。
羟脯氨酸的测定原理，主要是基于其氧化物的结构类似于吡咯能与对一二甲氨基苯甲醛缩合而产生红色化合物。其具体方法有两种：方法一为为皮肤羟脯氨酸测定法：取皮肤0.2g，投入适量冷丙酮中，与4℃中脱脂2天，中途换液两次，然后于0.05M醋酸中去丙酮12小时，中途换液一次，然后加入 20ml6NHCL与110摄氏度的水中水解24小时，过滤水解液稀释至20ml，取1ml用双缩脲的方法检查水解液，证明水已经水解完全。取此测试液0.1ml加水0.9ml，按绘制标准曲线法测得吸光度值，即可求出羟脯酸含量。其标准曲线的绘制方法：先配置1mg/ml羟脯氨酸母液，在配置成浓度分别为50ųg/ml、25 ųg/ml、12.54 ųg/ml、6.25 ųg/ml、5 ųg/ml的标准液。分别取标准液1ml，缴入1ml0.05M氯胺T，摇匀，于25℃恒温加热2分钟，再加入1ml3.15M过氯酸、摇匀，于室温下放置5分钟在加1ml10%对二甲氨基苯甲醛，摇匀，60℃加热20分钟，冷却后，560nm比色，根据测得的吸光度值支撑标准曲线。方法二为小老鼠尾腱羟脯氨酸测定法：首先，将小老鼠处死，剥离得到白色尾腱，然后用蒸馏水将尾腱洗干净，滤纸吸干后，将尾腱在1:1丙酮—乙醚混合液中脱脂两次，每次24小时，将脱脂后的样品置入105℃的烘箱内脱水干燥至恒重，然后准确称取5mg样品置于30ml烧瓶内。加1ml浓盐酸在110℃水解8小时以上，在将水解液用氢氧化钠和并加蒸馏水稀释到25ml，然后，在按上述方法测定1ml样品中羟脯氨酸的含量，可计算出尾腱羟脯氨酸的浓度，进而可换算出胶原的含量 |
